1.- OBJETIVO:
Número de microorganismos que se encuentran en un agua de muestra mediante nefelometría.
2.- FUNDAMENTO:
El espectrofotómetro es un aparato de uso habitual en cualquier laboratorio de tratamiento de aguas. Mide la densidad óptica, es decir, la absorbancia. Se debe realizar una curva estándar para relacionar los valores de absorbancia con la masa bacteriana en una muestra problema. La cantidad de luz dispersada es proporcional al cociente entre el tamaño de la partícula y la longitud de onda incidente; la sensibilidad de la técnica aumenta a longitudes de onda (λ) cortas. Se mide el número de células que hay, tanto vivas como muertes usando la siguiente tabla:
ESCALA MC FARLAND:
Se preparan tubos con esa cantidad de cloruro de bario y ácido sulfúrico mediante pipeta y prepipetas con el volumen indicado, y se rotulan los tubos.
3.- MATERIALES Y REACTIVOS:
- Espectrofotometro
- Cubetas
- Agua estéril
- Pipetas de diferentes volúmenes
- Prepipetas de varios volúmenes
- Tubos de ensayo con tapón
- Ácido sulfúrico 0,36M
- Cloruro de bario 0,048M
- Agua de muestra sembrada en agua peptona
- Agua de peptona
4.- PROCEDIMIENTO:
Cogemos agua estéril para hacer el blanco del tubo 0.
Utilizamos 4 tubos que nos serán suficientemente representativos para realizar la recta de calibrado.
Sacaremos la siguiente tabla que nos sera útil para los siguientes cálculos.
5.- CÁLCULOS:
La ecuación es: Y=a + bx = 0,0461 + 0,069x
Ahora debemos medir la absorbancia de nuestra muestra para trasladarla a la ecuación.
Para ello debemos hacer un blanco con una cubeta de agua peptonada estéril. Seguidamente ya podemos medir nuestra agua de muestra.
La absorbancia de nuestra agua de muestra a dado como resultado: A= 0,400
Este dato lo sustituimos en la recta por la letra Y.
Despejamos X y obtenemos el número de células tanto vivas como muertas que se encuentran en nuestra muestra.
6.- RESULTADOS:
Nuestra muestra tiene unas 5,13 · 10^8 Nº de células.
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