1.- OBJETIVOS:
Tincionar una muestra para ver los microorganismos que se encuentran en el
portaobjetos.
2.- FUNDAMENTO:
Diferenciar mediante la tinción entre las paredes celulares de las bacterias Gram negativa y Gram positiva.
Mientras que la pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano, además de 2 clases de ácidos teicoicos, la capa de peptidoglicano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior por medio de lipoproteínas. Ambos tipos de bacterias se tiñen diferente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha más proporción que las Gram negativas.
3.- PROCEDIMIENTOS:
1.- Tomamos un portaobjetos y colocamos una gota de solución salina siempre que la muestra no este ya diluida.
2.- Tomamos la colonia y la disgregamos.
3.- Dejamos secar la preparación al aire o bien calentando muy suavemente.
4.- Fijar a la llama pasándola 4 o 5 veces por ella.
5.- Inundar el portaobjetos con cristal de violeta 1 min.
6.- Lavar con abundante agua corriente el exceso de colorante.
7.- Cubrir con lugol 1 min.
8.- Lavar con agua el exceso de lugol.
9.- Decolorar dejando caer el alcohol-acetona 7:3 gota a gota sobre el portaobjetos inclinado, hasta que no se desprenda color. no superar 1 min con la decoloración.
10.- Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
11.- Inundar con safranina durante otro min.
12.- Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
13.- Secar la preparación.
14.- Examinar al microscopio con el objetivo 100X y aceite de inmersión.
4.-MATERIALES Y REACTIVOS:
- Cubeta de cristal
- Puente de tinción
- Mechero bunsen
- Vaso de precipitado
- Pipeta Pasteur x3
- Asa de siembra
- Portaobjetos
- Agua destilada
- Papel secante
- Lugol
- Safranina
- Cristal violeta
5.- RESULTADOS:
COCOS Y BACILOS
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