miércoles, 8 de junio de 2016

Tinción de gram

TINCIÓN DE GRAM

PRÁCTICA 6


1.- OBJETIVOS:

Tincionar una muestra para ver los microorganismos que se encuentran en el
portaobjetos.

                                  2.- FUNDAMENTO:


Resultado de imagen de tincion de gram

Diferenciar mediante la tinción entre las paredes celulares de las bacterias Gram negativa y Gram positiva.

Mientras que la pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano, además de 2 clases de ácidos teicoicos, la capa de peptidoglicano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior por medio de lipoproteínas. Ambos tipos de bacterias se tiñen diferente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha más proporción que las Gram negativas. 





3.- PROCEDIMIENTOS:

1.- Tomamos un portaobjetos y colocamos una gota de solución salina siempre que la muestra no este ya diluida.

2.- Tomamos la colonia y la disgregamos.

3.- Dejamos secar la preparación al aire o bien calentando muy suavemente.

4.- Fijar a la llama pasándola 4 o 5 veces por ella.

5.- Inundar el portaobjetos con cristal de violeta 1 min.

6.- Lavar con abundante agua corriente el exceso de colorante.

7.- Cubrir con lugol 1 min.

8.- Lavar con agua el exceso de lugol.

9.- Decolorar dejando caer el alcohol-acetona 7:3 gota a gota sobre el portaobjetos inclinado, hasta que no se desprenda color. no superar 1 min con la decoloración.

10.- Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.

11.- Inundar con safranina durante otro min.

12.- Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.

13.- Secar la preparación.

14.- Examinar al microscopio con el objetivo 100X y aceite de inmersión.




4.-MATERIALES Y REACTIVOS:
- Cubeta de cristal

- Puente de tinción

- Mechero bunsen

- Vaso de precipitado

- Pipeta Pasteur x3

- Asa de siembra

- Portaobjetos

- Agua destilada

- Papel secante

- Lugol

- Acetona (30% acetona y 70% Etanol)

Safranina

- Cristal violeta
5.- RESULTADOS:

COCOS Y BACILOS


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