Preparación medios de cultivo

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Práctica 3

OBJETIVO:

Aprender a preparar medios de cultivo para saber su utilidad, composición, tipos de medio que podemos encontrar y que microorganismos crecen en ellos.

Un medio de cultivo nos sirve para separar y aislar microorganismos que tenemos en una muestra, para identificar un microorganismo problema y conocer la evolución de ese microorganismo.


Estudiar colonias en un medio, realizar antibiogramas, pruebas de concentración mínima inhibitoria y conservación de especies.

¿DE QUE SE COMPONE UN MEDIO DE CULTIVO?

Tenemos nutrientes energéticos como las fuentes de carbono (glucosa, lactosa, almidón) o fuentes de nitrógeno que es menos energética pero necesaria (proteínas, peptonas, extractos de carne…)

También los nutrientes no energéticos como el agua (Indispensable para no alterar equilibrio de sales), sales minerales para equilibrio osmótico y aportar micronutrientes, fuentes de azufre (sulfatos, tiosulfatos) y fuentes de fosforo en forma de fosfatos.

Podemos añadir al medio de cultivo agentes solidificantes (Agar, gelatina), tampones para estabilizar el pH, indicadores de pH (rojo neutro, azul de bromotimol, fenolftaleína), agentes reductores para ayudar a la anaerobiosis en el medio.


En otros casos factores de inhibición para evitar el crecimiento de algún tipo de microorganismo (azida sódica para Gram -, Verde Brillante para Gram +, Sales biliares para organismos no entéricos, antibióticos…)

 TIPOS DE MEDIOS: 

Según su consistencia pueden ser:

Si son caldos (sin agar), sólidos (con agar 15-17 gr/L, gelatina o albúmina) o semisólidos (agar 3-5 gr/L).

Su composición: 

Siendo definidos los que se conocen totalmente y complejos los que su composición química exacta no es conocida

Su utilidad:

Para medios generales o comunes, enriquecidos y medios selectivos. Medios diferenciales y medios de transporte y conservación. 

PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO:

1.-Se pesa la cantidad deseada de medio que queremos hacer (normalmente en el bote pone cuantos gramos son por litro, con una regla de 3 se puede sacar la cantidad si es menos o más de un litro).

2.-Disolver los gramos en agua destilada siguiendo las instrucciones del fabricante.

3.-Se esteriliza el medio en autoclave excepto cuando en el bote te ponga que no se debe hacer como en Slanetz-Bartley.

4.-Una vez esterilizado se pondrá en un tubo (debe ser puesto antes de ser esterilizado en este y podrá ser en medio líquido o agar inclinado, en este caso se deja inclinado cuando se encuentra líquido para que solidifique en esa posición)  o en placa Petri, se esteriliza el medio en una botella o matraz Erlenmeyer y luego cuando se enfríe (45 ºC) se pasa a verter en placas petri, se hace en condiciones de esterilidad con un mechero bunsen y al final se almacena en posición invertida en el frigorífico.