Recuento en placa de salmonella

RECUENTO EN PLACA DE SALMONELLA

PRÁCTICA 8

1.- OBJETIVO:

Realizar una siembra de césped en verde brillante y recontar las colonias que crezcan.

2.- FUNDAMENTO:

El verde brillante es un medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., excepto S. typhi y S. paratyphi, a partir de muestras clínicas, alimentos, y otros materiales de importancia sanitaria.

3.- PROCEDIMIENTO:

1.- Preparamos nuestro lugar de trabajo con los materiales y desde el principio usamos el mechero bunsen para crear las condiciones de esterilidad necesaria para un cultivo.

2.- Con los cuatro tubos puestos en la gradilla, los rellenamos con 9ml cada uno de agua destilada estéril que cogeremos con una pipeta también estéril.

3.- Seguidamente cogemos 1 ml de agua de muestra con la micropipeta y la echamos sobre el primer tubo, con la boquilla estéril.

4.- Con la misma boquilla estéril, cogemos 1ml de la primera dilución y lo pasamos al segundo tubo donde ahora tendremos una dilución 1/100 y así respectivamente con el tubo 3(1/1000) y tubo 4(1/10.000).

5.- Importante cada vez que se pasa al siguiente tubo, mezclar bien el tubo para que se haga homogénea la mezcla y que se haga bien la siguiente dilución.

6.- Tendremos una placa preparada de medio Verde Brillante en la que sembraremos 1ml de cada dilución. Rotular en cada una qué dilución se ha puesto para después comprobar el resultado. En el primer tubo, pondremos que es la 1/10.

7.- La siembra se hace con el asa de Digralsky, esparciendo por la placa el líquido de la dilución. Es importante flamear el asa en alcohol antes y después de usarla para seguir con las condiciones de esterilidad.

8.- Se hace moviendo el asa en círculos, y girando la placa para que llegue a todas las zonas la dilución.

9. Lo dejamos secar bien y metemos en la estufa a 37ºC y boca abajo.

4.- MATERIALES:

- Medio Verde Brillante

- Asa de siembra de Digralsky

- Placas de petry

- Alcohol

- Mechero bunsen

- Micropipeta de 1ml

- Boquillas micropipeta esteriles

- Vasos de precipitado

- Pipeta estéril 10ml

- Agua destilada

- 4 Tubos de ensayo

- Mechero

- Gradilla

5.- CÁLCULOS:

264(colonias) · 10(tubo 1/10)/ 1 (ml de siembra)= 2640 UFC/ml Salmonella

Las otras placas eran menos de 30 colonias por lo que no se puede contar.

6.- RESULTADOS:

Nos salieron 264 colonias en el tubo 1/10 de Salmonella, y una colonia de E.Coli

2640 UFC/ml Salmonella