Recuento de enterococos fecales por filtración

RECUENTO DE ENTEROCOCOS FECALES POR FILTRACIÓN

PRÁCTICA 11

1.- OBJETIVO:

Recontar enterococos fecales en el medio agar Slanetz-Bartley y hacer la siembra mediante filtración con kitasato 100ml. 50 muestra/50 agua estéril.

2.- FUNDAMENTO:

Slanetz-Barley es un medio muy selectivo indicado para aislamiento y recuento de enterococos fecales en agua y en alimentos, con la técnica de filtración de membrana o con el método de siembra en superficie (no crece E. coli).

3.- PROCEDIMIENTO:

1.- Preparamos el lugar de trabajo montando el matraz kitasato con sus partes y el aparato de vacío. También encendemos el mechero bunsen ya que necesitamos condiciones de esterilidad.

2.- Teniendo el agua muestra ya preparada, preparamos en un vaso de precipitado alcohol para  flamear las pinzas y en la placa Petri estéril ponemos agua destilada estéril para dejar el filtro que vamos a usar y que se despegue la parte sobrante.

3.- Para coger el filtro flameamos primero las pinzas con cuidado, cogemos le filtro y lo pasamos a la placa Petri con el agua estéril hasta que se despegue bien el trozo sobrante del filtro.

4.- Vamos a poner el filtro encima del Kitasato y cerramos con el embudo para filtrar, ponemos las pinzas de seguridad para que no se vaya a caer el embudo  y hacer mejor la filtración.

5.- Encendemos la bomba de vacío, el agua irá pasando por el filtro, en este paso asegurarnos que todo el aparato de filtrado está bien apretado sino la aspiración será escasa y tardará más.

6.- Al terminar retirar pinzas de sujeción, embudo y coger el filtro con las pinzas (previamente esterilizadas flameándolas).

7.- Se deja el filtro en la placa Petri del medio agar Slanetz-Bartley lentamente para no hacer burbujas entre el medio y el filtro.

8.- Rotular la placa con los datos necesarios sobre el recuento que se está realizando, fecha y persona.

9.- Guardar el cultivo boca abajo y a una temperatura de 44ºC durante 18-24 horas.

4.- MATERIALES:

- Mechero

- Vasos de precipitado (agua destilada estéril, agua muestra, alcohol)

- Embudo

- Probeta 100 ml

- Pipeta Pasteur

- Matraz Kitasato

- Alcohol

- Agua Destilada Estéril

- Placa Petri estéril

- Pinzas

- Mechero Bunsen

- Filtro reticulado

- Placa Petri con cultivo Slanetz-Bartley

5.- RESULTADOS:

Salieron menos de 30 colonias, por lo que no se pueden contar.