Siembra de cultivos

SIEMBRA DE CULTIVOS

PRÁCTICA 5

1.- OBJETIVOS:

Sembrar cultivos para contarlos posteriormente.

2.- FUNDAMENTO:

Inocular o sembrar en un medio artificial una muestra es lo fundamental para que finalmente podamos incubar dicho medio a cierta temperatura y que después podamos contarlo.

3.- PROCEDIMIENTO:

1.- Ponemos un mechero bunsen cerca de la mesa de trabajo donde vamos a hacer la siembra, esto nos dará condiciones de esterilidad necesarias para este proceso.

2.- Flameamos el asa que vayamos a usar en cada caso. Según el asa deberemos llevarla al rojo vivo o ponerla antes en alcohol para solo flamear un momento.

3.- Cogiendo con la mano no dominante el recipiente de la muestra procedemos a:

-En placa: Manteniéndola invertida se levanta cara la llama, se toma una porción de la colonia que queramos sembrar y se cierra la placa.

-En tubo: se sujeta el tapón con el meñique de la mano dominante y se flamea la boca del tubo para esterilizarlo, seguidamente se sumerge el asa y se remueve para coger las colonias, volvemos a flamear la boca del tuvo y cerramos.

4.- Volvemos a esterilizar el asa una vez terminado

• En medio líquido sumergimos el asa y agitamos para que se desprenda el inóculo.
• En medio semisólido vamos a usar una picadura hundiendo el asa y retirando posteriormente por el mismo trayecto.
• En tubo con medio sólido podemos hacerlo de diferentes formas: En tubo con agar horizontal que sería por picadura, en agar inclinado o slant (pico de flauta) que se desliza el asa haciendo un zigzag desde el fondo hacia la parte superior, aunque también se puede combinar empezando con picadura y terminando con zigzag.
• Cuando hablamos de siembra en placa, en medio sólido, con ella tendremos colonias de cada célula viable que plantemos en este caso es más amplio porque hay diferentes métodos de siembra.

-Por siembra de agotamiento en estría para aislar, tenemos dos formas: Estría simple con una sola línea en zigzag y con la siembra lo más lejos del operador, y la estría múltiple que se descarga de 3-4 veces en estrías, cada vez esterilizando el asa de siembra y dejando que se enfríe. En este caso es importante que la primera estría se junte con la segunda solo dos veces, la segunda con la tercera dos veces y la tercera con la cuarta solo una vez.

-La siembra en superficie, con césped o inundación, añadiendo un volumen conocido por una pipeta estéril y removiendo con asa Digralsky. Según dilución se podrá luego contar más o menos (no es lo mismo una dilución 1/10 que 1/1000).



Cuando vayamos a usar el horno o estufa es importante que esté a la temperatura necesaria para el cultivo que vayamos a usar, ya que no es lo mismo para mesófilos (35-37ºC) que termófilos (44ºC).